Quantificação direta de proteínas de espectrofotômetros (método UV)
Este método é testar a proteína diretamente em um comprimento de onda de 280 nm. Selecione a fórmula de Warburg, o fotômetro pode mostrar diretamente a concentração da amostra ou selecione o método de conversão apropriado para converter o valor de absorbância na concentração da amostra. O processo de determinação de proteínas é muito simples. Teste primeiro o branco e depois teste a proteína diretamente. Devido à presença de algumas impurezas no buffer, a informação de “background” a 320 nm é geralmente eliminada e esta função é ajustada para “ON”. Semelhante ao ácido nucleico de teste, o valor de absorvância de A280 é necessário para ser pelo menos maior que 0,1 A, e o intervalo linear ótimo é entre 1,0-1,5. Quando a fórmula de Warburg foi usada para mostrar a concentração da amostra no experimento, a leitura foi encontrada como “derivada”. Este é um fenômeno normal. De facto, desde que a observação do valor de absorvância de A280 não exceda 1%, o resultado é muito estável. A razão para o desvio é que o valor de absorbância da fórmula de Warburg é convertido em concentração e multiplicado por um determinado fator. Enquanto houver uma ligeira alteração no valor de absorbância, a concentração será amplificada e o resultado será muito instável. Os métodos de quantificação direta de proteínas são adequados para testar proteínas relativamente simples e relativamente de componente único. A quantificação direta UV é mais rápida e mais fácil de executar que a colorimetria; no entanto, é suscetível à interferência de substâncias paralelas, como a interferência do DNA, e a baixa sensibilidade requer altas concentrações de proteína.
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